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蛋白纯化手册已发布【经典版】最全蛋白纯化手册  
重组猪瘟E2蛋白简介

国家于2017年取消了猪瘟强制免疫,并要求到2020年所有种猪场达到猪瘟净化标准。然而现阶段以C株为主导的兔化弱毒疫苗并不能满足需求。活苗的外源病原污染、抗原定量难、母源抗体干扰、免疫耐受、无法鉴别诊断等缺陷也日益显现。

2017年12月25日,天康生物猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗(Rb-03株)(商品名为“天瘟净”)获农业部审批,被批准为二类新兽药。它可以通过对E0或NS3蛋白抗体检测来区分免疫和野毒感染猪,进而为猪瘟净化提供科学诊断和依据。


随着集约化养殖规模的扩大和新疫病的不断出现,现有的常规疫苗(灭活苗、弱毒苗)已愈来愈无法满足于畜牧业发展的更高要求。与此同时,作为现代生物学技术发展的新兴产物,克服了传统疫苗诸多缺点(安全性较低、稳定性差、无法鉴别诊断等),基因工程疫苗正日益成为动物疫苗研制领域中的新宠。


2018年,国内首个猪瘟E2基因工程疫苗的问世吸引了行业内外的广泛关注,那么到底什么是猪瘟E2疫苗?


注:本段内容摘自《新牧网》
重组猪瘟E2疫苗发展趋势

我国在2007年开始实施的猪瘟强免计划,使我国的猪瘟疫情得到了有效控制。现在猪场中曾经的典型猪瘟早已千里难寻,取而代之的猪瘟更像一只“看不见的手”,在随处撩拨着猪瘟防控的现有规则。此外,国家于2017年取消了猪瘟强制免疫,并要求到2020年,所有种猪场要达到猪瘟净化标准。这一举措不但全面激活了猪瘟疫苗市场,也宣示着政府整合市场及自身资源,努力推进我国猪瘟疫病净化的决心。如今,在“净化”的大旗下,便于鉴别诊断的标记疫苗成为了市场亟需产品。


然而现阶段以C株为主导的兔化弱毒疫苗并不能满足需求。C株兔化弱毒苗自研制后广泛应用长达60多年,被业界惯称为“安全、高效”的疫苗典范。但完美的C株也并非“神苗”,随着人们对猪瘟防控和根除的需求更替,活苗外源病原污染、抗原定量难、母源抗体干扰、免疫耐受、无法鉴别诊断等缺陷和不足也日益显现。


为了更好地解决以上问题,随着生物技术的进步,一些新型疫苗开始被研发和生产,其中基因工程疫苗因可以完美规避现有活苗的诸多缺陷,并且适合于大规模生产,更关键的是可以实现免疫动物和感染动物的鉴别诊断,发展前景最为看好。猪瘟E2疫苗就属于这样一种基因工程疫苗。


重组猪瘟E2蛋白纯化方法
     重组猪瘟E2蛋白目标有杆状病毒表达系统,大肠杆菌表达系统,CHO细胞表达系统,在构建克隆时通常在序列中都会加入his-tag方便下游纯化,用金属螯合层析可快速纯化,后经凝胶过Focudex G-25脱盐,即可达到很高的纯度。
杆状病毒/CHO表达E2蛋白纯化工艺

在过金属螯合层析时,可通过优化缓冲液中盐浓度,及缓冲液pH,洗脱时线性梯度等优化提高纯度及收率。

注:亲和层析后的凝胶过滤脱盐工艺有多种工艺路线可尝试,相比超滤等其它方式,凝胶过滤的脱盐工艺过程温和,回收率高。
大肠杆菌表达胞内可溶E2蛋白纯化工艺重组猪瘟E2纯化策略

条条大路通罗马,到底怎么样的纯化工艺路线是最佳路线呢?没有捷径,这还需要根据E2蛋白的特性等进行实验验证,上面只是宏观的纯化思路,请您指正!
汇研生物已有成熟工艺项目
PCV2-Cap-VLPs(昆虫细胞-杆状病毒)纯化工艺
PCV2-Cap-VLPs(酵母)纯化工艺
PCV2-Csp-VLPs(大肠杆菌)纯化工艺
猪圆环全病毒疫苗纯化工艺(吸附模式)
猪瘟E2(大肠杆菌)纯化工艺
腹泻全病毒纯化工艺
口蹄疫VLPs(大肠杆菌)纯化工艺
口蹄疫O型病毒纯化工艺
狂犬疫苗(Vero细胞)纯化工艺
猪蓝耳全病毒纯化工艺
腺病毒载体纯化工艺
猪干扰素(大肠杆菌)纯化工艺

发表于 2019-9-3 08:48:31 | 显示全部楼层 |阅读模式

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