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生物咖啡茶

细胞因子简介
由免疫细胞(如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等)和某些非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等)经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。通过结合相应受体调节细胞生长、分化和效应,调控免疫应答。

细胞因子(cytokine,CK)是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质,具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、APSC多能细胞以及损伤组织修复等多种功能。


细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等。

下面就以重组表皮生长因子为例简单阐述细胞因子类物质的分离纯化。
重组表皮生长因子
20世纪80年代以前,hEGF的来源主要是通过组织和体液提取,由于hEGF 的含量极微,造成提取成本高且产品纯度低,使hEGF的应用受到了限制。80年代以后,随着基因工程技术的发展,人们通过基因重组技术,利用大肠杆菌、酵母菌等生产hEGF获得了成功,为工业化生产rhEGF打下了基础。
大肠杆菌表达的EGF纯化
1.用20mMTris ,400mM NaCl pH8.0以1:10的比例重悬离心后的大肠杆菌并破碎。
2.破碎后收集上清,过Ni Focurose 6FF(IMAC)柱,平衡缓冲同破碎缓冲液,以150cm/h的流速平衡10CV.
3.平衡完后以100cm/h的流速上样。
4.上完样后应平衡缓冲液加20mM咪唑以150cm/h的流速淋洗5CV.
5.淋洗完后用平衡缓冲液加300mM咪唑洗脱,以150cm/h的流速洗脱3CV
6.用20mMTris , pH8.0以50cm/h的流速平衡Focudex G-25层析柱,平衡5CV.
7.将Ni Focurose 6FF(IMAC)的洗脱峰按G25柱20%CV的体积上样脱盐。
8.用20mMTris , pH8.0以150cm/h的流速平衡DEAE Focurose 6FF层析柱,平衡10CV.
9.G25脱盐后的EGF样品以100cm/h的流速上DEAE柱。
10.DEAE柱上样结束后,用DEAE平衡缓冲液加50mM NaCl以150cm/h的流速淋洗5CV.
11.DEAE柱淋洗完后用20mMTris ,500mM NaCl  pH8.0洗脱,收集吸收峰进行脱盐保存备用。

—以上流程为参考设计流程,实际实验生产时要进行合理的优化调整!
酵母表达的EGF纯化
具体过程可参考大肠杆菌表达EGF的纯化过程。

发表于 2019-2-28 09:35:50 | 显示全部楼层 |阅读模式

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