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生物咖啡茶

本帖最后由 汇研生物 于 2018-10-26 11:05 编辑

生物工艺中常用添加剂:
TritonX -114(曲拉通)温度在22℃以上时,在蛋白质溶液中加入2%的TritonX -114可使蛋白质从去垢剂相和液相中分离,可溶性蛋白在液相中,而膜蛋白则进入了去垢相中。(内毒素存在于细胞壁组分,菌裂解后释出物中。)是生物工艺中去除内毒素最常用的萃取剂。在膜蛋白提取中应用广泛。用量1%-2%
TritonX -100(曲拉通)
亲水端和疏水端,可将膜蛋白从细胞膜上解离下来,达到提取膜蛋白的作用。常用的非离子性去垢剂。用量:1%-3% TritonX -100
)L-Arginine(L-精氨酸)
增加蛋白质的溶解性,阻止蛋白质分子间通过疏水作用发生凝聚而产生沉淀。用量:0.4-0.6mol/L,用途广泛,低溶解度生物常用的助溶剂。
DTT(二硫苏糖醇)
常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部(溶剂不可及)的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性(高温加热或加入变性剂,如6M盐酸胍、8M尿素或1%SDS)。用量:1-2mM.
EDTA(乙二胺四乙酸)
螯合剂,消除微量重金属导致的酶催化反应中的抑制作用。不影响蛋白质功能的情况下去除干扰金属离子,但是同时能使金属蛋白酶丧失活性。用量:0.1—5mmol/L。IDA/IMAC(NTA) 的Ni避免添加,若样品中含有较高浓度的EDTA时,需要用金属螯合亲和层析纯化时,推荐选择武汉汇研生物的Ni Focurose 6FF(TED),此镍填料可以耐受100mM的EDTA.(联系:W/T:15771973009)
Glycerol(甘油)
增加黏度,减少分子间的碰撞,用量:5%-30%。生物分子在保存时的常用添加剂,可以有效防止蛋白聚集沉淀。
SDS(十二烷基硫酸钠)
能够使蛋白质变性的阴离子型去污剂,用量:0.1%-1%。
Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂)
抑制酸性蛋白酶,配置时溶于甲醇中,在水中不溶解。用量:1ug/ml。Store at:-4℃(A week)/-20℃(Half a year)。
Leupeptin(亮抑蛋白酶肽)
抑制丝氨酸和巯基蛋白酶,配置时溶于水,用量:1ug/ml。Store at:-4℃(A week)/-20℃(Half a year)。
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发表于 2018-10-26 11:00:49 | 显示全部楼层 |阅读模式

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发表于 2020-8-11 16:24:44 | 显示全部楼层

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